冰箱细菌的温床_冰箱细菌培养方法

1.下列关于细菌真菌培养的过程，培养步骤正确的是（　　） A．配制培养基→高温灭菌→接种→冰箱 B．

2.传代保藏法适用范围

3.如何抑制细菌的生长和繁殖

4.冰箱里的细菌为什么不会被冻死？

5.冰箱也会发霉！除菌清洁6大招，别让冰箱变成细菌培养皿！

菌种保藏是食用菌产业的一项基础工作，是确保野生种质基因留存和现有生产用种遗传性能相对稳定的必要手段。菌种保藏的方法多种多样，有的虽然保藏效果好，但投资高或操作繁杂。在生产实践中，更需要设备投入少，能保障菌种不死亡、不污染、最大限度地保持优良种性的简便方法，如斜面低温短期保藏和自然基质较长期保藏相结合的方法。

一般而言，对母种进行长期保存，对原种进行短期保存。须保证优良菌种的性状和活力不发生变异，不死亡，不被污染，确保其纯度。因此，保存方法应具备取材容易、操作方便、菌种不易退化、长期保存不污染杂菌等优点。常用的菌种保存方法如下：

（一）斜面低温保藏 该法的优点是保藏方便且所占空间较小。具体做法是：菌丝长满斜面后，放在0～5℃保存。以后每隔一定时间（2～3个月）转管一次。转管保存不能长期用PDA培养基，否则种性易退化，灰树花降解木质纤维素的能力减弱。因此隔一定时间（1年左右）须把菌种转接到木屑培养基上复壮，之后挑选健壮无污染的菌丝再转回PDA培养基保存。在长期保存过程中，要防棉塞受潮滋生杂菌。菌种试管口最好用蜡烫封，以防培养基内水分过快蒸发。增加琼脂用量（2.5%～3%）可减缓水分蒸发。还要防止菌种管上的标签脱落而造成种系混杂。

斜面低温保藏方法简便易行，能随时观察保藏菌株的活力和纯度，一旦染杂，肉眼能及时发现。

（二）自然基质保藏 此法是根据灰树花的特性，利用自然基质保藏其菌种的方法。灰树花是木腐菌，可以用以木屑为主料的培养基。自然基质营养全面，且大部为缓释养分，不易产生营养过剩或饥饿；其次，培养基理化性状好，可吸收或缓冲菌丝代谢出的有害物质，水分与通气协调平衡，部分菌丝扎入基质内生长，不裸露于空气中，菌丝呼吸强度低，生命力强。

1.原料与配方 粗、细木屑比例适当，用板栗树木屑最佳，粗木屑粒径为2毫米左右，细木屑为一般圆盘锯屑，粗、细的比例为1∶2，添加干木屑重量20%的麸皮和1%的糖，含水率为60%左右。这样的基质通气性好，营养丰富且供菌丝分解利用的时间长，长到基质内部的菌丝比包裹在基质外部暴露于空气中的菌丝耐受性强。不同粒径的基质比例适当，还能协调气与水的矛盾。粗粒过多，架空菌丝多；细粒过多，透气性差，菌丝生长慢。应用配方如下：

栗木屑78%，麸皮20%，石膏1%，蔗糖1%，水65%配料，装入较粗大的试管中，装料量为试管的1/3～1/2，1.5千克/厘米2灭菌1.5小时。冷却后，接入需保藏的菌种，在28℃下培养，待菌丝长满木屑培养基时取出换上无菌橡皮塞，在0～5℃冰箱内保藏1～2年转管一次。

2.容器与装量 用容量250毫升的葡萄糖玻璃瓶，清洗洁净，装量一般不超过玻璃瓶容量的3/5，填料不能过满，瓶壁所残留的颗粒须擦拭干净，否则保藏的菌种易引起污染。

3.灭菌和冷藏 灭菌时若用棉塞封口，基质表层易失水，接种成活率低，即使菌丝复活，生长也很缓慢，所以最好用聚丙烯膜封口，接种后换用无菌棉塞培养，待菌丝长满后再换成有孔灭菌胶塞冰箱保藏。

用上述方法保藏的菌种经3年贮放后，接出成活率均达90%以上，出菇验证产量及子实体形态特征均无明显变化。因此，自然基质保藏法具有保存期长，菌种遗传性能相对稳定的特点。

（三）木粒PDA斜面保藏 灰树花在自然状态下易发生于栗树根部，这说明其营养需求较为特殊。根据灰树花这种习性，在PDA基础上添加适量的栗树木粒制成母种培养基。在多年的使用中发现，用该培养基培养的母种生长势好，在转接原种时，适应能力强，萌发定植快；用作菌种保藏基质时，保藏时间长，并能很好保持菌种的优良性状。

1.木粒PDA的制作 选取栗树边材，加工成0.3～0.5厘米的颗粒，及时烘干或晒干备用。称取葡萄糖10克，KH2PO41克，1溶解于1升清水中配制成营养液。将营养液倒入盛有木粒的小铝锅中，营养液以完全浸没木粒为准。煮沸10分钟，以加快木粒对营养液的吸收速度，起锅静置30分钟让木粒吸足营养液。捞出木粒，沥掉表面的水，装入试管，装量为试管长的1/6，最多不得超过试管长的1/5，否则在摆制斜面时，不易使木粒均匀分散于斜面的表面上。

选取新鲜的马铃薯，去皮并切成薄片，称取200克放入小铝锅中，加入1升清水，文火煮沸30分，趁热过滤取汁，并补足1升的体积。称取琼脂20克，葡萄糖20克，KH2PO4 2克，MgSO47H2O 2克。先将琼脂剪碎，加入到马铃薯滤液中，继续用文火加热，使琼脂溶化。待琼脂完全溶化后，加入称好的其他3种营养成分，搅拌使这些物质溶解均匀，趁热装入已装有木粒的试管中，装至试管长的1/3处，塞上棉塞。

在0.8～1千克/厘米2蒸气压下灭菌40分，待气压降至0时，开盖取出，趁热轻轻抖拍试管，使木粒分散后即可摆制斜面，并使木粒呈半裸状分布于斜面上，待凝固后便制成了木粒PDA培养基。

2.生长及保藏效果 木粒PDA斜面上培养的灰树花母种，菌丝生长迅速、良好，12天即可长满试管，但菌丝的后期生长势更为粗壮、浓密，后劲足。转接原种时，菌种适应力强，定植快。这表明，灰树花菌丝的生长速度、生长势不仅取决于本身的遗传性，而且很大程度上取决于培养基的营养。常规PDA的营养成分，主要是可溶性的速效性营养，前期营养丰富，营养利用直接，因而前期菌丝生长迅速、良好，后期营养则不足，菌丝生长不良，长势欠佳。木粒PDA由于在增添了木粒这一缓效性营养，就木腐性的灰树花而言，营养配伍合理，补充了菌丝生长后期所需的营养，因此后劲足。

菌丝体对基质的分解利用是通过菌丝细胞分泌的胞外酶，将基质中的大分子营养分解成小分子营养后才被吸收利用的，而这些胞外酶大多为诱导酶，其合成与分泌受基质的诱导和分解产物阻遏机制调节。就纤维素酶而论，许多易代谢碳源（如葡萄糖等）具有引起酶合成阻遏作用，同时伴随着菌丝体的旺盛生长，酶的大量合成则出现在易代谢碳源基本耗尽之后，且受到基质纤维素的诱导，常规PDA基质，到葡萄糖等易代谢碳源基本耗尽的后期，由于营养的缺乏，菌丝生理机能下降，酶的合成量减少。而木粒PDA不仅含有易代谢碳源——葡萄糖，又含有木粒这一缓效性营养，前期葡萄糖促进了菌丝体旺盛生长，获取了大量的菌丝体，表现为菌丝粗壮、浓密。到了易代谢碳源耗尽的后期，木粒一方面补充了后期所需的营养，使菌丝的生埋机能维持在一定的水平；另一方面木粒的纤维素激活菌丝细胞纤维素酶的诱导机制，合成了大量的酶，保持了木腐生性灰树花较强的分解木材的能力，因此，用该培养基培养的母种在转接原种时适应力强，萌发定植快。因部分菌丝长入木粒内部，抵抗不良环境的生存能力增强，种质不易退化。木粒PDA灰树花菌种，在0～5℃保藏2～3年再转管活化，成活率仍达到90%左右。此外，木粒PDA应用于木腐性灰树花种的提纯复壮，效果也较理想。

（四）石蜡隔氧封藏 具体做法是将液态石蜡分装入三角瓶内，装量达瓶空间的1/3，塞好棉塞，于121℃灭菌2小时，然后置40℃温箱中，使其水分蒸发，或置于干燥器内数日以除去水分，石蜡呈透明状为宜。在无菌条件下，用无菌吸管装入已长好菌丝的斜面试管，使液面高出斜面顶部1厘米左右。塞上无菌橡皮塞，竖直保存。此法可使菌种存活3年以上，但以1～2年移植一次为好。移植时不必倒出石蜡，用接种钩取一块菌丝即可。因转移时带有石蜡，菌丝生长弱，需要再转管1～2次，方能复壮。

下列关于细菌真菌培养的过程，培养步骤正确的是（　　） A．配制培养基→高温灭菌→接种→冰箱 B．

质粒的抽提与纯化实质上是将质粒DNA与细菌的基因组染色体DNA、RNA、蛋白质、细胞膜等细 胞器及其他大分子物质分离的过程，因此质粒的抽提大致可分为：细菌的培养、收集与裂解；质粒DNA 的分离与纯化；浓度、纯度的鉴定三个过程。

①染色体DNA的去除 ：在富集培养目标菌种后，首先应裂解细菌细胞，用含有SDS的NaOH溶液裂解菌体释放质粒，同时氢氧化钠的强碱性，可使DNA氢键断裂，双螺旋结构破坏而变性，再加入中和缓冲液，可使部分变性的质粒DNA复性，而染色体DNA不复性，因此使质粒DNA与染色体 DNA分离开。

②细菌中的RNA可以通过RNaseA去除

③蛋白质的去除 ：细菌中的蛋白质可以通过酚/氯仿/异戊醇抽提，酚可以使蛋白质变性，氯仿将微溶 于水的酚抽提到有机相中，使其与水相中的DNA分离。分离后的质粒DNA可以通过乙醇回收，乙醇可以消除核酸水化层，暴露其带负电的磷酸基团，因 此在阳离子充足的环境中可以发生”核酸–乙醇沉淀

④蛋白质、染色体DNA、细胞碎片、以及在分离过程中与试剂形成的不溶复合物都可以通过离心去除。

⑤试剂盒法DNA的回收 :除碱裂解法以外，还可以通过试剂盒抽提质粒DNA，在碱裂解进行变性和复性后的纯化回收通过纯化柱进行。纯化柱中的硅胶膜能在高盐、低PH条件下吸附体系中的 DNA，将其与其他杂志分离，而在低盐、高PH条件下DNA又可以被洗脱下来。

⑥纯化后的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计鉴定

电泳法 ：带负电荷的DNA分子在外加电场的作用下向正极泳动，不同分子量大小与构型的DNA分子泳动速率不同，因此可以在琼脂糖凝胶上呈现不同的条带。在凝胶中加入核酸染料可以方便我们观察，因为核酸染料可以嵌入到DNA碱基之间，避免被凝胶中的氢离子淬灭，因而亮度更高。

紫外分光光度法 ：DNA的吸收峰在260nm处，蛋白的吸收峰在280nm处，因此可以用OD260/OD280判断DNA纯度，一般认为比值在1.8~2.0之间时，纯度较高

材料：

含有pSK II质粒的大肠杆菌菌株的菌液、含有MP3质粒的大肠杆菌菌株的菌液

试剂：

①细菌的培养：LB培养基、氨苄青霉素

②细菌的裂解与收集：溶液I（Tris-HCl、EDTA、Glucose）、溶液II（NaOH、SDS）、溶液 III（KOAc、CH3COOH）、RNAseA

③质粒DNA的分离与纯化：酚/氯仿/异戊醇、无水乙醇、70%乙醇、1XTE溶液（Tris-HCl、 EDTA）、东盛生物小提质粒盒

④电泳：琼脂糖、0.5XTBE电泳缓冲液、StarGreen DNA Dye、loading buffer、1XTE buffer

①细菌的培养：

将含有pSK II和MP3质粒的大肠杆菌菌液分别于LB培养基上划线 → 37℃过夜培养 → 挑取培养基上的单菌落于液体LB培养基中，震荡培养过夜

②细菌的收集与裂解

- 碱裂解法

吸取1.5ml菌液12000rpm离心1min (沉淀菌体)

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弃上清培养液 (完成细菌的收集)

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加入150ul溶液I和3ul RNaseA，震荡混匀，静置2min (悬浮菌体、去除RNA)

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加入250ul溶液II，轻柔颠倒混匀，放置至清亮(不超过5min。裂解菌体、释放质粒，此步骤动作轻柔，防止基因组DNA断裂，且时间不宜过长)

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加入180ul溶液III，颠倒混匀，冰浴10min （中和反应，防止基因组DNA污染）

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12000rpm离心5min，吸取上清80ul，重复此操作 (此时已完成了染色体DNA、RNA、细胞碎片、部分 蛋白质的分离)

③质粒DNA的分离

加入53ul的酚/氯仿/异戊醇上下颠倒抽提10min，静置分层 （DNA在水相中），12000rpm 离心10min

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通风橱中吸取上清，加入20体积的无水乙醇 （发生核酸-乙醇沉淀）

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12000rpm离心5min,倒掉乙醇，短暂离心10s，用移液枪吸取乙醇

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加入500ul 70％乙醇洗涤DNA沉淀，离心5min，倒掉乙醇，离心10s，用移液枪吸取乙醇，将其放置在通风橱中促进乙醇挥发

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加入300ul 1XTE溶解，65℃热板温育10min

④纯化质粒DNA

加入1XTE使溶液为300ul，加入300ul酚/氯仿，充分震荡抽提5min(去除蛋白)

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12000rpm离心5min，吸取上清

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加入1/10体积3M NaAc和2倍体积的预冷无水乙醇，混匀

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置于-70℃冰箱15min沉淀DNA

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4℃12000rpm离心15min，倒掉乙醇，离心10s，用移液枪吸去乙醇

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0.5ml 70%乙醇洗DNA沉淀一次，离心2min，倒掉乙醇 （去除DNA中的盐离子）

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离心10s，移液枪吸去乙醇，在50-60℃热板上烘干1min

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加入20ul 1XTE溶解DNA沉淀，并在65℃热板上温育10min （使DNase失活）

-试剂盒抽提法

加入溶液III离心后的上清液置于DNA纯化柱中，静置2min

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12000rpm离心1min，弃滤液 （DNA被吸附到硅胶膜上）

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加入500ul溶液PB，12000rpm离心1min，弃滤液 （洗脱蛋白、盐等杂质）

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加入500ul溶液W，12000rpm离心1min，弃滤液 （重复此步骤一次，洗掉多余盐离子及乙醇）

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12000rpm离心3min （彻底去除纯化柱中残留的液体）

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将DNA纯化柱置于新的离心管中，向纯化柱中央处悬空滴加80ul溶液Eluent，室温静置2min （将硅胶吸附柱上的质粒DNA洗脱下来）

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12000rpm离心1min （管底即为质粒DNA）

⑤琼脂糖凝胶电泳观察

制胶：

称取1.2g琼脂糖加入盛100ml 0.5XTBE电泳缓冲液的250ml 三角瓶中，摇匀

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微波炉加热至琼脂糖溶解（沸腾）

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放在冷水中冷却，加入10ul的StarGreen DNA Dye，摇匀

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琼脂糖倒入模具中，插上梳子 。凝固后向上垂直拔出梳子，将凝胶转移到电泳槽中，加入0.5XTBE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1mm

点样：

按照碱裂解法纯化前的MP3、pSK II样品各3ul、5ul Marker（10ug/ul、20ug/ul、60ug/ul）、碱裂解法纯化后的MP3、pSK II样品各6ul，试剂盒提取的MP3、pSK II样品各2ul的顺序依次加入点样板小孔中，再分别加入10Xloading buffer，配置10ul点样体系，吹吸混匀

电泳：

打开电源开关，调节电压3-5V/cm

观察：

将电泳好的凝胶置于凝胶成像仪中观察

传代保藏法适用范围

如何抑制细菌的生长和繁殖

传代保藏法适用生物细胞、细胞器或等活体长期。包括细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌、高等真菌、单细胞藻类、人和动物细胞系、转基因细胞、杂交瘤、原生动物、地衣、植物组织培养、植物、动植物、噬菌体、质粒、基因片段、基因文库和其它生物材料（最高物理防范等级不超过P2级）以及生物材料的混合培养物等各类培养物（生物材料/菌种）。

1、传代培养保藏法

又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。

2、液体石蜡覆盖保藏法

是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。

3、载体保藏法

是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

冰箱里的细菌为什么不会被冻死？

抑制细菌繁殖过程中细胞壁的形成,因此可以使用抗生素。

已知抗生素的作用部位大致有几种：

（1）抑制细胞壁的形成，如青霉素，主要是抑制细胞壁中肽聚糖的合成，多氧霉素（一种效果很好的杀真菌剂）主要作用是抑制真攻细胞壁中几丁质的合成。

（2）影响细胞膜的功能，如多粘菌至少与细胞结合，作用于脂多糖、脂蛋白，因此对革兰氏阴性菌有较强的杀菌作用，制霉菌素与真菌细胞膜中的类固醇结合，破坏细胞膜的结构。

（3）干扰蛋白质的合成，通过抑制蛋白质生物合成抑制微生物生长的抗生素较多，如卡那霉素、链霉素等。

（4）阻碍核酸的合成，主要通过抑制DNA或RNA的合成，抑制微生物的生长，例如利福霉素、博莱霉素等。

1、充足的营养：必须有充足的营养物质才能为细菌的新陈代谢及生长繁殖提供必需的原料和足够的能量。

2、适宜的温度：细胞生长的温度极限为-7℃～90℃，各类细菌对温度的要求不同，可分为嗜冷菌，最适生长温度为（10℃～20℃）；嗜温菌，20℃～40℃；嗜热菌,在高至56℃～60℃生长最好，病原菌均为嗜温菌，最适温度为人体的体温，即37℃，故实验室一般用37℃培养细菌。

有些嗜温菌低温下也可生长繁殖，如5℃冰箱内，金**葡萄球菌缓慢生长释放毒素，故食用过夜冰箱冷存食物，可致食物中毒。

3、合适的酸碱度：在细菌的新陈代谢过程中,酶的活性在一定的PH范围才能发挥，多数病原菌最适PH为中性或弱碱性（pH7.7.6），人类血液、组织液PH为7.4，细菌极易生存，胃液偏酸，绝大从数细菌可被杀死，个别细菌在碱性条件下生长良好,如霍乱孤菌在PH8.9.2时生长最好；也有的细菌最适pH偏酸，如结核杆菌（pH6.6.8）、乳本乡杆菌（pH5.5）.细菌代谢过程中分解糖产酸，PH下降,影响细菌生长，所以培养基中应加入缓冲剂，保持PH稳定。

4、必要的气体环境：氧的存大与否和生长有关,有些细菌仅能在有氧条件下生长；有的只能在无氧环境下生长；而大多数病原菌在有氧及无氧的条件下均能生存，一般细菌代谢中都需CO2，但大多数细菌自身代谢所产生的CO2即可满足需要.有些细菌，如脑膜炎双球菌在初次分离时需要较高浓度的CO2（5～10%），否则生长很差甚至不能生长。

冰箱也会发霉！除菌清洁6大招，别让冰箱变成细菌培养皿！

在冰箱的低温环境中，细菌不会被冷冻致死，而只能抑制细菌的生长速度。

一。冰箱内食品常用的冷藏温度为4℃~8℃。在这种环境下，大多数细菌的生长速度会减慢。.然而，一些细菌，如耶尔森菌和李斯特菌，可以在这个温度下迅速生长。如果他们吃了感染了这些细菌的食物，就会引起肠道疾病。长期存放在冰箱中的食品，不能避免食品的腐败和污染。长期保存只是人们的一厢情愿。冰箱应该经常清空和清洁，这是确保健康的方法。

对于抵抗力低的孩子来说，冰箱里细菌的危害更令人担忧。儿童胃肠道正处于生长发育阶段，过多饮用冷饮或过冷食物更容易造成其胃粘膜损伤。因为胃肠道的消化吸收功能下降，孩子的营养得不到保证，体质就会下降。因此，经常吃过冷食物或饮料的儿童更容易生病。

冰箱里经常混入生食和熟食，容易感染病菌。有人误以为冰棍、冰激凌等饮料中的细菌已被冻死。多吃没关系。其实，细菌在低温下只会降低新陈代谢，减缓或停止繁殖，不可能被冻死。在室温下经过一段时间后，它们可以再次迅速繁殖。特别是冷饮中含有糖、牛奶、淀粉等物质，是细菌良好的培养基，有利于细菌的快速繁殖和生长。人们吃的受细菌污染的冷饮越多，就越有可能引起肠道疾病。

专家提醒，要想避免细菌的危害，日常生活中应该注意一些细节。首先，冷藏食物时，应将生食与熟食分开，避免交叉感染。

第二，我们必须定期清洁冰箱以保持它的清洁。

第三，食物从冰箱取出后，食用前必须加热，加热温度必须保持在70℃2分钟以上。只要达到温度和时间，李斯特菌就可以被完全杀死。

张承宇墙壁、水槽、天花板等处的霉斑严重影响家中的美观，是许多人清洁居家环境的头号目标，但你可曾注意过，家里冰箱的「制冰盒」也可能暗藏霉菌？近年医界认为，除了引发过敏、气喘，霉菌甚至可能与阿兹海默症有关。 快跟着日本达人传授的简单方法，就从现在起清洁家里冰箱冷藏室与制冰盒，根绝霉菌毒害！ 制冰盒容易孳生霉菌，简单定期清理助预防 近年美国阿兹海默症权威戴尔?布雷德森博士也指出，霉菌很可能就是造成阿兹海默症的主因之一，因此防止家中霉菌滋生刻不容缓。而日本除霉专家、千叶大学真菌医学研究中心副教授矢口贵志表示，冰箱的自动制冰区若是没有定期清洁，也可能让霉菌滋生而发霉。 日本家事达人松浦纯则建议用3个步骤，轻松就能清除冰箱制冰盒的霉菌： 一格一格盛放冰块的制冰盒要定期用清水冲洗，制冰盒每1年最少要清一次。 将制冰区装水的给水盒取出，不用加清洁剂，冲洗过后用软布或海棉擦拭，并注意盒子4个角落都要确实擦到，也不要用过硬的刷子刷，以免伤害盒子，让霉菌更容易躲藏在缝隙中。给水盒建议每3个月至少清洁一次。 最后是新型冰箱自动制冰区的给水管路，只要在300ml水里面加入30g柠檬酸，使用柠檬酸水制冰即可（使用柠檬酸制成的冰块不可食用），柠檬酸能溶解水垢的主成分「碳酸钙」，能帮助清洁管路、防止霉菌滋生。 张承宇墙壁、水槽、天花板等处的霉斑严重影响家中的美观，是许多人清洁居家环境的头号目标，但你可曾注意过，家里冰箱的「制冰盒」也可能暗藏霉菌？近年医界认为，除了引发过敏、气喘，霉菌甚至可能与阿兹海默症有关。 快跟着日本达人传授的简单方法，就从现在起清洁家里冰箱冷藏室与制冰盒，根绝霉菌毒害！ 制冰盒容易孳生霉菌，简单定期清理助预防 近年美国阿兹海默症权威戴尔?布雷德森博士也指出，霉菌很可能就是造成阿兹海默症的主因之一，因此防止家中霉菌滋生刻不容缓。而日本除霉专家、千叶大学真菌医学研究中心副教授矢口贵志表示，冰箱的自动制冰区若是没有定期清洁，也可能让霉菌滋生而发霉。 日本家事达人松浦纯则建议用3个步骤，轻松就能清除冰箱制冰盒的霉菌： 一格一格盛放冰块的制冰盒要定期用清水冲洗，制冰盒每1年最少要清一次。 将制冰区装水的给水盒取出，不用加清洁剂，冲洗过后用软布或海棉擦拭，并注意盒子4个角落都要确实擦到，也不要用过硬的刷子刷，以免伤害盒子，让霉菌更容易躲藏在缝隙中。给水盒建议每3个月至少清洁一次。 最后是新型冰箱自动制冰区的给水管路，只要在300ml水里面加入30g柠檬酸，使用柠檬酸水制冰即可（使用柠檬酸制成的冰块不可食用），柠檬酸能溶解水垢的主成分「碳酸钙」，能帮助清洁管路、防止霉菌滋生。 冰箱冷藏区也要注意防霉 日本居家生活类型网站「KURASHI Market（暂译：生活市场）」也指出，许多人以为冰箱冷藏区温度低、不容易发霉，但其实冷藏区通风不良，同时调味料造成的污渍、肉类、鱼类的汁液以及蔬菜的水分等，都是霉菌喜欢的营养，而且每次开关冰箱时，也会导致冰箱温度提高，增加霉菌滋生风险。因此建议平常要注意以下几点来帮助预防： 不要经常开关冰箱门。 热食先放凉再冰。 若发现冰箱中的脏污，立刻用纸巾擦拭干净。 不要将发霉的食物放进冰箱。 而如果不幸已经有冰箱发霉的状况，则建议以下列方式清洁： 将所有食材及冰箱中的层板、盒子取出，关闭冰箱开关。 将小苏打水（比例大约是1小匙小苏打：100ml水）装进喷雾罐后喷冰箱内部，静置1小时后擦拭干净，冰箱中的层板、盒子也以同样方式清洁。 再将冰箱门打开，让冰箱内部风干。 冰箱内的橡胶制部件、胶条等，则建议以5倍水稀释氧系漂白剂来擦拭。